ELISA -优化技巧

通常，优化ELISA检测成分(抗体、缓冲液、样品)是通过测试不同的溶液来确定每个成分的理想工作浓度。对于捕获抗体，在涂层缓冲稀释5至15µg/ml的未纯化抗体和1至12µg/ml的亲和纯化抗体准备。亲和纯化抗体推荐最佳的信噪比。样品加入时应有高、低浓度，反映预期的工作范围。对于检测抗体，可以在标准稀释液中进行类似的稀释设置，未纯化抗体为1至10µg/ml，亲和纯化抗体为0.5至5µg/ml。

有许多商业阻塞缓冲区可供选择，其中一些包含BSA。这些缓冲区的制造商通常提供广泛的优化协议。如果阻断缓冲液不是预先配制的，可以尝试不同浓度的蛋白质，比如BSA。

某些类型的样品可以引起基质效应，例如血清或血浆。这些可以通过稀释样品来减少。标准稀释剂应尽可能紧密地反映样品的基体，并检查稀释剂的线性，以保证良好的动态范围。