微孔板类型对于底读至关重要
另一个需要考虑的因素当然是您使用的透明底板类型-您使用的是不透明壁的组织培养板吗?板子是白色的还是黑色的?透明的底部是用聚苯乙烯还是玻璃做的?
回答上述问题与感兴趣的光波长紧密相关。 如果要检测可见光（350-900 nm），通常可以使用塑料底部。 但是，要在350 nm以下进行检测，需要使用紫外线透明材料制成的底部，例如石英或现代COP / COC聚合物。 作为最后的手段，可以使用更昂贵的光学玻璃底板，以便从顶部和底部进行检测，就像在显微镜下观察低背景的细胞。
黑白板之间的主要区别在于它们的反射特性。 白板会反射光，并将使光输出信号最大化。 另一方面，黑板会吸收光并减少背景和孔间干扰。 因此，白色板通常用于发光测定，而黑色板用于荧光测定。
什么时候底读提供更好的结果?
- 研究对象为在平板底部生长并仅在其底部附着侧或附近表达，结合或分泌荧光团的贴壁细胞。
趋化性分析监测细胞通过膜的迁移。 通常通过顶部读数和底部读数两者的组合来对此进行分析。
某些基于细胞的分析(如GeneBLAzer®或QBT™脂肪酸摄取)不能从顶部读取，因为检测中使用的缓冲液的光学特性干扰荧光体的激发或发射。
如果仍然不确定使用哪种读取技术，您可以对微孔板读数仪进行方法设定，运行一个包括顶读和底读的方法，并比较结果，以作出最终选择。
GeneBLAzer®是Invitrogen公司的注册商标。
QBT脂肪酸摄取是分子器件的商标。